文章标题：热胁迫下八字地老虎hsc70基因在不同组织转录表达差异性分析

文章作者：王 玲1** 杨 帅2 朱明贺1 徐忠新1 赵奎军1*** 韩岚岚1***
关 键 词：八字地老虎，热激同源蛋白70，实时荧光定量PCR，Western blotting
文章摘要：

  【目的】 为探讨八字地老虎Xestia c-nigrum（Linnaeus）Xe-hsc70基因表达与高温耐受性之间的关系，比较热胁迫下Xe-hsc70基因在不同组织中诱导表达的差异。【方法】 本研究以八字地老虎4龄幼虫为研究对象，采用RT-PCR和RACE技术克隆获得编码热激同源蛋白70（70 ku heat shock cognate，HSC70）的基因（命名为Xe-hsc70）cDNA全序列与基因组DNA序列（Genomic DNA，gDNA），并利用实时荧光定量PCR和Western blotting技术，比较分析不同热胁迫温度及不同热诱导时间下八字地老虎4龄幼虫体内马氏管、中肠、体壁、脂肪体与唾腺5个组织中Xe-hsc70基因在mRNA转录与蛋白表达两水平上相对表达量的变化。【结果】 比较分析克隆得到的Xe-hsc70 基因cDNA全序列和gDNA序列，结果表明Xe-hsc70基因含有8个内含子，最大内含子（561 bp）位于5′端非编码区，并含有一个类似热激应答原件HSE的核心结构序列（gaatatgCaGAAtgTTCcaGaa），其余内含子（长度在86~218 bp之间不等）均在编码区内，本研究首次报道了八字地老虎hsc70内含子的具体数目及位置。组织差异性分析显示：在常温25℃条件下，Xe-HSC70在脂肪体中表达量最高，在唾腺中表达量最低；经热激诱导后中肠、唾腺与体壁组织中Xe-HSC70的表达量与对照（25℃）相比显著上调，随着热激时间的延长，表达量呈现出先升高后恢复至对照水平的变化趋势，脂肪体和马氏管Xe-HSC70表达量与对照相比无明显变化。【结论】 八字地老虎不同组织在应对热胁迫的过程中，抗逆机制具有明显的差异。Xe-HSC70的不断积累是八字地老虎对热胁迫不断适应的一个过程，其组织中Xe-hsc70基因的高表达在八字地老虎抗热胁迫的过程中起着重要作用，并为从分子水平上研究八字地老虎的抗逆机理提供依据。