文章标题：桔小实蝇幼虫总蛋白双向电泳技术体系的建立和优化

文章作者：白蓉蓉1, 2** 金 涛2 金启安2 林玉英2 温海波2 彭正强2***
关 键 词： 桔小实蝇，蛋白质提取方法，双向电泳
文章摘要：

【目的】建立和优化桔小实蝇幼虫Bactrocera dorsalis (Hendel)总蛋白的双向电泳条件。       【方法】 使用BPP法和3种TCA-丙酮法(TCA-丙酮-A法：直接加入裂解液磨样；TCA-丙酮-B法：样品提取液中加入40 mmol/L DTT；TCA-丙酮-C法：样品提取液中加入0.07% β-巯基乙醇)提取桔小实蝇幼虫总蛋白；使用13 cm和24 cm pH 4~7的IPG胶条分离桔小实蝇幼虫总蛋白；使用考马斯亮蓝法及硝酸银染色法对双向电泳凝胶进行染色；使用5800 MALDI-TOF-TOF MS/MS 质谱分析仪对BPP法获得的特异蛋白进行质谱鉴定，并将检索数据库物种分别设为Metazoa (Animals)与Drosophila (Fruit flies)进行数据库检索。【结果】 TCA-丙酮法中，TCA-丙酮-C法提取效果最好，BPP法优于所有TCA-丙酮法；使用考马斯亮蓝染色与硝酸银染色效果相当；使用24 cm胶条的蛋白分辨率明显高于13 cm胶条；检索数据库物种设为Metazoa (Animals)可获得比Drosophila (Fruit flies)更加全面的信息。 【结论】 使用24 cm pH 4~7的IPG胶条对BPP法提取的桔小实蝇幼虫总蛋白进行双向电泳，采用考马斯亮蓝法对双向电泳凝胶进行染色，可得到更好的双向电泳图谱，检索数据库时检索物种可优先设为Metazoa (Animals)。