文章标题：一种适合蚊虫总RNA提取及样本保存的方法

文章作者：黄文雨；卢 莹；尹灿灿；马高风；刘 啸；邵黄芳；李梦楠；孙恩涛
关 键 词：蚊虫；SDS法；改良SDS法；RNA提取；样本保存
文章摘要：

【目的】 建立适合蚊虫总RNA提取的方法，探讨4种不同保存样本方法对蚊虫总RNA提取的影响。【方法】 以室温、4 ℃冰箱、﹣20 ℃冰箱、﹣80 ℃冰箱4种不同方法保存蚊虫为研究对象，运用改良SDS法、传统SDS法和TRIzol法分别提取蚊虫总RNA，用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR检测提取RNA的质量，并比较提取效果。【结果】 改良SDS法、传统SDS法和TRIzol法提取蚊虫总RNA的浓度值分别为1.223 3 ± 0.374 3、0.675 0 ± 0.319 8、0.310 0 ± 0.123 6，3种方法的浓度值差异具有统计学意义（F＝14.767，P < 0.001）。经LSD检验，改良SDS法提取蚊虫总RNA的浓度高于传统SDS法、TRIzol法（P＝0.005、P < 0.001）；改良SDS法提取的蚊虫总RNA纯度较高，A₂₆₀/A₂₈₀、A₂₆₀/A₂₃₀分别在1.8-2.0及2.0-2.2之间；电泳检测结果表明28 s、18 s及5.8 s条带清晰完整，条带之间无弥散，且无苯酚、蛋白质和gDNA污染；β⁃actin扩增显示符合RT-PCR的实验要求。在一个月内，﹣20 ℃、﹣80 ℃冰箱保存的蚊虫样本，其总RNA的提取未见明显降解。【结论】 改良SDS法是一种经济便利、可提取高质量蚊虫RNA的方法。﹣20 ℃、﹣80 ℃冰箱在一个月内对蚊虫样本具有较好的保存效果。