【目的】 DNA条形码技术已经在多个类群中得到了广泛应用，但对数量巨大的鳞翅目昆虫而言，仍然缺失大量数据，尤其是形态鉴定较为困难的小蛾类和很多中型蛾类，尚无法构建较为完善的DNA条形码系统。本研究旨在为鳞翅目害虫DNA条形码系统的构建和完善提供数据来源及支撑，验证COⅠ基因作为DNA条形码通用基因的准确性，探讨28S rDNA的D2基因片段作为DNA条形码辅助基因的可行性，并检验目前BOLD系统的鉴定成功率。【方法】 对采集自北京白羊沟风景区的小蛾类和中型蛾类490头标本进行形态鉴定和DNA测序，分别基于COⅠ及28S D2基因计算种内种间遗传距离，并构建了NJ系统发育树。【结果】 BOLD系统的鉴定成功率为65%，对小蛾类和夜蛾类鉴定成功率较低。基于COⅠ基因的NJ树鉴定成功率为94.4%，基于28S D2基因的NJ树鉴定成功率为89.4%。【结论】 结合种内与种间遗传距离结果，COⅠ基因适合作为鳞翅目蛾类DNA条形码通用基因，28S D2基因较为保守，不适合作为DNA条形码的辅助基因。