文章标题：中华按蚊和雷氏按蚊实时荧光定量PCR鉴定方法的建立与应用

文章作者：舒黄芳，王可艺，吴 德，林荣幸，卢文成，阮彩文，邓卓晖，张 萌，宋 铁
关 键 词：中华按蚊；雷氏按蚊；TaqMan探针；实时荧光定量PCR
文章摘要：

【目的】 建立中华按蚊Anopheles sinensis与雷氏按蚊Anopheles lesteri实时荧光定量PCR（qPCR）检测技术，为2种传疟按蚊的准确鉴定提供分子鉴定方法。【方法】 建立2种按蚊的样本库，利用形态学方法和基因测序对蚊虫样本进行鉴定；合成并克隆阳性质粒质控品。从NCBI数据库上下载中华按蚊和雷氏按蚊的rDNA-ITS2序列，利用Prime 3软件在线设计2种按蚊的引物和探针，并验证该PCR方法的最低检测限、敏感性、特异性和可重复性。【结果】 收集并鉴定4种383头蚊虫，其中中华按蚊159头、雷氏按蚊104头、致倦库蚊Culex pipiens quinquefasciatus 60头和白纹伊蚊Aedes albopictus 60头。中华按蚊和雷氏按蚊的qPCR的最低检测限均为31.50 拷贝/反应，标准曲线线性关系相关系数（R²）均为0.99。敏感性和特异性均为100%，重复性试验结果显示，中华按蚊和雷氏按蚊的组内和组间变异系数均小于2%。【结论】 本方法所建立的TaqMan探针qPCR方法灵敏度高，特异性高，可用于中华按蚊和雷氏按蚊的分子鉴别。