文章标题：东方蜜蜂微孢子虫侵染过程中nce-miR-15325及其靶基因NCCS和DTIII分析

文章作者：钱加珺，荆 欣，张佳欣，范小雪，张文德，吉 挺，蔺哲广，陈大福，郭 睿
关 键 词：蜜蜂；意大利蜜蜂；东方蜜蜂微孢子虫；nce-miR-15325；靶基因；相对表达量
文章摘要：

【目的】 东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae侵染蜜蜂导致微孢子虫病，但侵染机制未明。本研究拟在前期工作基础上，验证nce-miR-15325的相对表达量及序列信息，并进一步检测nce-miR-15325及其靶基因在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂过程的相对表达量，为进一步探究nce-miR-15325调控侵染的功能和机制提供依据。【方法】 利用Stem-loop RT-PCR和Sanger测序对nce-miR-15325进行相对表达量及序列信息验证。利用相关生物信息学软件对nce-miR-15325的靶基因进行信息预测及分析。通过RT-qPCR检测nce-miR-15325及其靶基因的相对表达量。【结果】 鉴定到在东方蜜蜂微孢子虫孢子中nce-miR-15325真实存在并表达。预测到nce-miR-15325的11个靶基因，其中分别有3、4、7和4个靶基因可注释到KEGG、GO、Nr和Swissprot数据库。与接种后1 d相比，nce-miR-15325在2 dpi（day post inoculation, dpi）的表达量变化不显著，而在4、6和8 dpi时，相对表达量均显著下调（P<0.05），总体表达趋势呈下调。相较于1 dpi，靶基因NCSS在2、4、6和8 dpi的表达量均显著下调（P<0.05）；类似的，靶基因DTIII在2、4、6和8 dpi的表达量均显著下调（P<0.05），总体上表现出下降的表达趋势。【结论】 证实了东方蜜蜂微孢子虫孢子中nce-miR-15325存在和表达的真实性，明确了在东方蜜蜂微孢子虫侵染过程的nce-miR-15325及其靶基因的动态表达模式，揭示nce-miR-15325通过正调控NCSS和DTIII表达潜在调节侵染过程。