文章标题：棉铃虫钙粘蛋白N端多肽多克隆抗体制备及对Bt抗性的初步检测
文章作者：黄晶晶1**,韩斌1,常菊花2,沈文飚1***,沈晋良2
关 键 词：棉铃虫，钙粘蛋白，原核表达，多克隆抗体, Bt抗性
文章摘要：
用重组表达的棉铃虫Helicoverpa armigera（Hübner)中肠钙粘蛋白N端多肽片段制备兔多克隆抗体，并利用其对Bt抗性进行鉴定。通过RT-PCR方法对棉铃虫中肠钙粘蛋白N端多肽的基因片段Cad285进行PCR扩增，将其克隆到pET-30a原核表达载体中，在大肠杆菌BL21（DE3）中经IPTG诱导表达，得到35 ku 的重组融和蛋白，融合表达的包涵体经过变性、Ni-NTA柱亲和纯化、复性等方法处理包涵体，获得可溶性纯化蛋白，用纯化后蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体， ELISA检测其效价高于1∶16 000；利用最终获得的多克隆抗体对室内纯合Bt抗/感品系的棉铃虫中肠钙粘蛋白进行Western blot分析，结果显示敏感和抗性品系之间有明显差异，表明其能够应用对Bt抗性进行初步检测。