文章标题：褐飞虱flightin的原核表达及其在褐飞虱中差异表达检测

文章作者：张小琴 胡玉琼 张传溪
关 键 词：褐飞虱，flightin，原核表达，多克隆抗体，翅型差异, 发育差异
文章摘要：Flightin最早发现于果蝇的间接飞行肌中，并且定位于粗肌丝。这种蛋白对维持肌节的结构和功能起到了重要的作用，但其在具有长短翅型分化的褐飞虱的不同翅型间差异并不清楚。本研究以长翅型雌虫褐飞虱cDNA为模板，通过PCR扩增得到褐飞虱flightin基因ORF全长，将其连接到表达载体pGEX-6P-1 中以与谷胱甘肽S-转移酶（GST）融合表达。将表达载体转入大肠杆菌表达株Rosseta，在不同温度、不同浓度IPTG的条件下诱导表达flightin，得到了最优表达条件，获得了高水平可溶性表达。在用GST抗体进行Western blotting验证GST-flightin融合重组蛋白表达的正确性后，我们通过GST柱纯化了的GST- flightin，进而用纯化后的蛋白免疫新西兰兔制备了高特异性的多克隆抗体。最后，我们用制备的多克隆抗体检测了长、短翅型雌成虫和不同发育阶段的褐飞虱体内flightin的表达差异。结果显示，flightin仅在长翅型成虫中表达，在短翅型雌成虫中未检测到其明显表达，而且flightin只在成虫期表达。本研究为进一步研究褐飞虱的flightin与其它蛋白互作、翅肌发育和翅型分化打下了基础。