文章标题：草地贪夜蛾PP2A的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达

文章作者：郝少东**,杨宝东,王进忠***,张志勇***,张民照,郑林青,孙淑玲
关 键 词：草地贪夜蛾，蛋白磷酸酶2A，分子克隆，原核表达
文章摘要：

为建立斑蝥素等PP2A抑制剂的体外活性测定方法，用于以杀虫剂为目的的药物快速活性评价，本研究首次同源克隆了鳞翅目昆虫草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda (J.E. Smith)的PP2A催化亚基cDNA全长序列，探索了该基因在大肠杆菌中的表达。结果显示，S. frugiperda的PP2A编码一条309个氨基酸的肽链，预测其蛋白质分子量为35.46 ku，等电点5.37。分析蛋白质氨基酸序列，没有发现信号肽和跨膜结构，推测该PP2A主要存在于胞质中。多重比对分析S. frugiperda及其它昆虫的PP2A，表明PP2A的保守性较高，可以用S. frugiperda PP2A作为研究斑蝥素等抑制剂的药物筛选靶标酶，用于杀虫剂的筛选。利用该基因构建pET30aPP2A原核表达载体转化至E. coli BL21(DE3)中，在16~30℃，0.2~0.8 mmol/L的IPTG下均能成功诱导PP2AHis表达，经Ni琼脂糖柱纯化后可以得到SDSPAGE呈现单一条带的纯化蛋白，电泳纯度大于90%，为进一步活性测定奠定了基础。