《应用昆虫学报》

文章标题:朱砂叶螨几丁质合成酶基因1全长cDNA的克隆与表达分析

文章作者:辛天蓉** 邹智勇 闵 强 李 雷 吴轩德 王雅瑜 邹志文 夏 斌***
关 键 词:朱砂叶螨,几丁质合成酶,基因克隆,表达
文章摘要:

【目的】 克隆朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus几丁质合成过程中的关键酶几丁质合成酶基因,并检测该基因在朱砂叶螨生长发育不同阶段的相对表达量。【方法】 本研究采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)以及cDNA末端快速扩增(RACE)技术首次克隆获得朱砂叶螨几丁质合成酶基因1的全长cDNA序列(命名为TcCHS1GenBank登录号为KM242062),并使用实时荧光定量PCR技术首次检测了TcCHS1基因在朱砂叶螨生长发育不同阶段的相对表达量。【结果】 朱砂叶螨TcCHS1基因的cDNA全长为4 881 bp,包括198 bp 5¢非翻译区(5¢-UTR),4 425 bp的开放阅读框(ORF),258 bp3¢非翻译区(3¢-UTR),开放阅读框编码1 474个氨基酸,预测其蛋白质分子质量约为168.35 ku,理论等电点为6.26。其包含EDRQRRRW2个几丁质合成酶基因的标签序列。氨基酸序列同源性分析结果表明:TcCHS1与其他昆虫该基因编码蛋白的氨基酸序列相似度在50%左右,与二斑叶螨Tetranychus urticae的氨基酸相似度最高(98%),与西方盲走螨Metaseiulus occidentalis的相似度为55%。分子系统进化的结果也表明TcCHS1与其他昆虫的CHS1聚在一起,并且和二斑叶螨具有最近的亲缘关系。荧光定量分析表明TcCHS1基因在朱砂叶螨生长发育的不同阶段(卵、幼螨、第1若螨、第2若螨、雌成螨和雄成螨)均有表达,在卵和雌成螨中的表达量较高,在第2若螨的表达量最低。【结论】 TcCHS1基因可能在朱砂叶螨生长发育过程中具有重要作用。