文章标题：马铃薯甲虫两个系统性RNA干扰缺失基cDNA的克隆、序列分析和时空表达

文章作者：杨 帅1** 付开赟2 吴家和3 李国清4 吐尔逊2 郭文超2***
关 键 词：马铃薯甲虫，系统性RNA干扰缺失基因，时空表达，定量PCR，mRNA水平
文章摘要：

   【目的】 克隆马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata (Say) 两条Sid-1基因的全长并分析其时空表达。【方法】 本研究通过RT-PCR和5¢/3¢ RACE等技术从马铃薯甲虫中克隆全长序列，通过序列多重比对和系统发育分析研究序列的保守性和基因起源，通过阶段收样，组织解剖和qPCR技术获得这两个基因的时空表达。【结果】 从马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata的4龄幼虫中克隆得到LdeSid-1a和LdeSid-1c，其mRNA全长为2 887和3 733 bp，编码759和782个氨基酸，分子量为86.19和90.27 ku，两条蛋白质序列的相似性为59%。与其它昆虫的系统性RNA干扰缺失基因的比对结果显示，LdeSid-1a和LdeSid-1c分属于鞘翅目系统性RNA干扰缺失基因的两个分支，均具有典型的11个跨膜域结构，在蛋白质序列的N端具有4段高度保守的基序。qPCR的时序分析表明LdeSid-1a和LdeSid-1c的表达从初孵幼虫开始逐渐上升，而LdeSid-1c在卵中的表达也较高，组织中的分布结果表明，两个基因在所有组织中均表达，在前肠、中肠和后肠以及生殖系统中表达较高，在神经系统中为优势表达。LdeSid-1a和LdeSid-1c的GenBank登录号为KR153284和KR153285。【结论】 LdeSid-1a和LdeSid-1c具有典型的系统性RNA干扰缺失基因家族的结构，时空表达和系统发育的结果均表明这两条基因可能在幼虫的高龄阶段起到重要作用。