文章标题：淡足侧沟茧蜂气味结合蛋白MpOBP8的基因克隆及原核表达分析
文章作者：杨 安1, 2** 梅国红3 张 浩2 蒋杰贤2 季香云2*** 陈义娟2
关 键 词：淡足侧沟茧蜂；MpOBP8；气味结合蛋白；优化表达
文章摘要：
【目的】MpOBP8是淡足侧沟茧蜂Microplitis pallidipes Szepligeti的气味结合蛋白，对于昆虫感知外界气味物质起着不可替代的作用。本研究旨在通过MpOBP8的克隆及其优化表达，获得可溶性目的蛋白，探索其嗅觉识别的分子机理。【方法】 通过半定量PCR对其组织差异表达进行分析；通过双酶切构建融合表达载体pET32a(+)-MpOBP8，在大肠杆菌中对其进行原核表达分析并对其表达条件进行了优化。【结果】 克隆得到了淡足侧沟茧蜂MpOBP8基因（GenBank登录号：MG457156），该基因含有459 bp的开放阅读框，编码152个氨基酸，推测分子量为17.57 ku，预测PI值为4.78。通过半定量PCR，在触角中检测到MpOBP8的表达，而在头、胸、腹中均未检测出表达。对其原核表达条件的优化显示：最佳诱导温度、诱导时间、诱导时机、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）的终浓度分别为25 ℃、6 h、菌体培养液OD600为0.1-0.3和0.1 mmol·L-1。大多数的靶蛋白能以上清形式表达，并通过纯化和浓缩得到了高浓度的
靶蛋白。【结论】 该研究克隆了淡足侧沟茧蜂的MpOBP8基因，并对其原核表达条件进行了优化，探明了该蛋白的最优表达条件，大量获得该气味结合蛋白，为后期研究MpOBP8的嗅觉识别分子机理奠定基础。