【目的】 研究建立可以准确检测小菜蛾血清中痕量β-蜕皮激素的超效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）分析法。【方法】 小菜蛾血清β-蜕皮激素样品用乙腈提取并进行蛋白沉淀，以C₁₈色谱柱分离，经UPLC-MS/MS检测，以芸苔素内酯为内标物，内标法定量。【结果】 结果表明，在0.5-50 μg/L浓度范围内β-蜕皮激素线性相关系数R²=0.999 8；在0.5、10和50 µg/L 3个添加水平下的平均回收率在91.9%-104.9%之间，相对标准偏差（RSD_S，n=5）在3.2%-9.2%之间；方法的定量限为0.5 µg/L。【结论】 该方法具有操作简单、灵敏度高，稳定性好，应用性强等优点，可为昆虫血清中的β-蜕皮激素检测提供科学准确的方法。