文章标题：微孢子感染东亚飞蝗实时定量PCR内参基因的筛选

文章作者：魏笑佳；何 岚；阿地拉·阿吉；季 荣；扈鸿霞
关 键 词：微孢子；东亚飞蝗；内参基因；实时定量PCR；表达稳定性
文章摘要：

【目的】 筛选出微孢子Paranosema locustae感染条件下东亚飞蝗Locusta migratoria实时定量PCR最适内参基因。【方法】 本研究应用实时荧光定量PCR技术测定东亚飞蝗甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因（Glyceralde-hyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）、18s核糖体RNA（18sRNA）、微管蛋白基因（Tubulin，TUB）、肌动蛋白基因（Actin，ACT）和延伸因子1基因（Elongation factor1，EF1）5个候选基因在3个微孢子浓度（1 × 10⁴、1 × 10⁶和1 × 10⁸个孢子/头）感染12 d后的表达稳定性；应用geNorm、Bestkeeper和Normfinder 3个软件综合分析5个内参基因的稳定性。【结果】 geNorm软件对5个内参基因在不同微孢子虫浓度感染下稳定性分析结果表明：18S基因稳定性最低，平均表达稳定性值M值最高为0.658 4，TUB基因稳定性最高，M值最低为0.278 4。NormFinder软件分析在不同微孢子虫浓度感染下的5个内参基因的稳定值分别为0.152（EF1）、0.181（ACT）、0.212（TUB）、0.329（GAPDH）和0.395（18S），可知内参基因稳定性顺序为：EF1 > ACT > TUB > GAPDH > 18S。由BestKeeper软件分析表明5个候选内参基因的SD值均小于1.0，表达均较稳定。根据其变异系数值CV的大小可知，ACT基因最为稳定。【结论】 综合3种软件分析结果，在不同微孢子虫浓度感染下，可选择的较为稳定的内参基因ACT、EF1和TUB基因作为相对定量的参照基因。