【目的】 克隆和表达管氏肿腿蜂Scleroderma guani毒液抗凝血酶Ⅲ（Antithrombin Ⅲ）基因SgAT-Ⅲ，为深入研究该毒液基因的生理功能奠定基础。【方法】 利用逆转录PCR技术克隆SgAT-Ⅲ基因开放阅读框（Open reading frame，ORF）序列，使用生物信息学软件分析其基因序列结构特征，通过qPCR技术分析其在雌成虫不同组织中的表达模式，采用载体pCzn1对其进行原核表达。【结果】 克隆得到SgAT-Ⅲ基因的ORF，长1 338 bp，编码446个氨基酸，其中第1-19位氨基端为信号肽，理论分子量49.49 ku，等电点6.23。多序列比对分析表明，SgAT-Ⅲ与蚂蚁AT-Ⅲ具有较高的氨基酸一致性（>64%），C末端具有serpin蛋白家族典型反应中心环区，含有供靶标蛋白识别的活性裂解位点。系统发育分析表明，SgAT-Ⅲ与膜翅目其他昆虫的AT-Ⅲ亲缘关系较近，且与蚂蚁的AT-Ⅲ聚为一支。qPCR分析表明，SgAT-Ⅲ基因在毒液器官中高表达。SDS-PAGE电泳检测发现，成功表达SgAT-Ⅲ重组蛋白，纯化得到高纯度的重组蛋白。【结论】克隆得到SgAT-Ⅲ基因，其在毒液器官中高表达，纯化得到SgAT-Ⅲ重组蛋白，为进一步研究该毒液基因的生理功能奠定了基础。