【目的】 为建立一种适用于鳞翅目昆虫类型Ⅱ性信息素环氧二烯同分异构体的分离制备方法。【方法】  本研究采用半制备高效液相色谱正向系统，结合蒸发光散射检测器和SunFire Silica OBD制备柱，建立了分离制备鳞翅目昆虫类型Ⅱ性信息素方法，制备样品经气相色谱质谱联用仪分析并最终通过田间诱捕试验验证。【结果】 采用0.5%四氢呋喃的正己烷溶液为流动相，流速为7 mL/min，蒸发光散射检测器漂移管温度为40 ℃，在增益设为500的条件下运行，类型Ⅱ性信息素环氧二烯同分异构体的分离效果较好，分离度为2.72-3.10，制备样品单体纯度高，制备样品回收率为80.73%-98.47%；将分离制备的C₁₈环氧二烯同分异构体混合物应用于田间诱捕试验，结果表明本方法制备的顺3,顺9-6,7-环氧十八碳二烯单体结合顺3,顺6,顺9-十八碳三烯可以专一性引诱灰茶尺蠖 Ectropis grisescens，28 d共计诱杀45.33头/诱捕器；制备的顺3,顺6-9,10-环氧十八碳二烯单体结合顺3,顺6,顺9-十八碳三烯可以专一性引诱优美苔蛾Miltochrista striata，28 d共计诱杀44.00头/诱捕器。【结论】 半制备高效液相色谱法是一种简单便利，高效易行的类型Ⅱ性信息素环氧二烯同分异构体的分离制备方法，可满足实验研究与小面积田间应用的需求。