文章标题：东亚飞蝗细胞色素P450基因的克隆及表达分析

文章作者：陈义昆1,邬玉兰2,李荔1,连国云2,刘志刚1,2**
关 键 词：东亚飞蝗， 细胞色素P450， 基因克隆， 表达
文章摘要：

本文克隆了东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis (Meyen)细胞色素P450（cytochrome P450）基因全长，表达重组蛋白，并对其可溶性进

行了分析。通过提取东亚飞蝗总的RNA，反转录成cDNA，设计特异性引物，PCR克隆东亚飞蝗细胞色素P450基因，将测序正确的目的片段克隆至

原核表达载体pET28a中，在大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta中用异丙基βD硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。用十二烷基硫酸

钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）检测重组蛋白表达结果。结果表明：东亚飞蝗细胞色素P450基因开放阅读框全长为1 551 bp，编码516

个氨基酸，与GenBank中已登录的东亚飞蝗细胞色素P450基因 (HM153426）的同源性为99%，重组质粒pET28aP450在E. coli Rosetta中获

得高效表达，重组蛋白相对分子质量（Mr）约为53 000，主要以包涵体的形式存在。