文章标题：飞蝗羧酸酯酶基因LmCarE25的体外重组表达

文章作者：王建新等
关 键 词：飞蝗，羧酸酯酶，Real-time PCR，原核表达，真核表达
文章摘要：羧酸酯酶（Carboxylesterase, CarE）是一类在生物中广泛分布的多功能家族酶系，在昆虫抗药性形成机制中发挥重要作用。为探讨飞蝗Locusta migratoria（Meyen）羧酸酯酶基因LmCarE25的生物学功能，本文采用荧光实时定量PCR技术进行研究，发现其在飞蝗成虫各组织部位均有表达，其中胃盲囊、翅和肌肉中表达量较低，中肠、马氏管和脂肪体表达量较高。本文尝试在大肠杆菌和昆虫细胞体外重组表达该酶，构建重组表达载体pET32a-LmCarE25，SDS-PAGE结果显示，LmCarE25可在大肠杆菌BL21(DE3)和JM109中表达，蛋白分子量约为60 kDa，但为包涵体；将LmCarE25基因插入真核表达载体pFastBacHTA中，借助Bac-to-Bac®体系获得重组Bacmid，以sf9细胞系作为宿主细胞表达目的蛋白，Western-Blot检测结果显示，LmCarE25获得可溶性表达。上述结果为进一步深入研究飞蝗羧酸酯酶家族功能提供了基础资料。