【目的】 从田间自然感病致死的暗黑鳃金龟Holotrichia parallela Motschulsky幼虫虫体中获得一株虫生真菌，明确该菌株的种类、培养特性及其对4种重要农业害虫的致病力，以期获得高毒力生防菌株。【方法】 采用培养基分离纯化培养菌株，在显微镜下进行形态鉴定，并观察菌落的生长特征，测定其生长速率、孢子产量和孢子萌发率；采用生物测定法，测定菌株对害虫的致病力。【结果】 确定该菌株为球孢白僵菌，在PDA和SDAY培养基上的菌落特征存在形态差异；在PDA培养基上的生长速率显著高于SDAY上的，孢子萌发率则显著低于SDAY上的，但在PDA和SDAY上的产孢量差异不显著。球孢白僵菌对亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis Guenée幼虫和二化螟Chilo suppressalis Walker幼虫的致病力最强，显著高于黄地老虎Agrotis segetum Schiffermüller和粘虫Mythimna separata Walker的；对同一种害虫5龄幼虫的致病力均大于2龄幼虫，其中，对黄地老虎和粘虫高龄幼虫的毒力显著高于低龄幼虫的。【结论】 本研究获得一株球孢白僵菌，对重要的农业害虫二化螟、亚洲玉米螟、黄地老虎和粘虫幼虫均有致病性，但致病力存在显著差异；对高龄幼虫的致病力大于低龄幼虫。感染二化螟、亚洲玉米螟幼虫最大校正死亡率可达94%以上，表明该菌株具有较大的应用潜能，适用于田间靶标害虫的生物防治。