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利用正交设计优化异色瓢虫SRAP-PCR反应体系
Optimization of SRAPPCR reaction system for Harmonia axyridis using orthogonal design
关桦楠*;迟德富**;宇 佳;董 婧
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DOI:
作者单位:东北林业大学生命科学学院 哈尔滨 150040
中文关键词:异色瓢虫, SRAP, 正交设计, 分子标记, 天敌昆虫
英文关键词:Harmonia axyridis, SRAP, orthogonal design, molecular marker, natural enemy
中文摘要:       利用正交设计L16.(45)对异色瓢虫Harmonia axyridis (Pallas)SRAP-PCR反应体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物)在4个水平上进行优化试验,试验结果用DPS和MINITAB软件进行分析,建立了异色瓢虫SRAP-PCR反应的最佳体系,即在20 μL体系中模板50~100 ng、引物0.25 μmol/L、dNTPs 0.1 mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5U、Mg 2+ 0.375~0.625 mmol/L。并对反应体系进行梯度退火试验,得到最佳退火温度为50.3℃。这一优化系统的建立,为今后利用SRAP技术进行瓢虫遗传图谱的构建、多态性分析和基因定位奠定了技术基础。


 

英文摘要:The orthogonal design was used to optimize SRAP-PCR reaction system for Harmonia axyridis (Pallas) using five factors (Taq DNA polymerase, Mg2+, DNA template, dNTPs and primer) at four levels, respectively. The results of PCR were analyzed by DPS and MINITAB and a most suitable SRAP_PCR system for H. axyridis was established. The 20 μL volume system contained 50~100 ng DNA template, 0.25 μmol/L primers, 0.1 mmol/L dNTPs, 1.5 U Taq DNA polymerase and 0.375~0.625 mmol/L Mg 2+. The optimal annealing emperature for SRAP-PCR was 50.3℃ based on gradient PCR. This system provided the opportunity for analysis of diversity, construction of genetic map and gene location in H. axyridis.
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