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思茅松毛虫四龄幼虫肠道好氧细菌的ARDRA分析及鉴定
Amplified ribosomal DNA restriction analysis and identification ofintestinal aerobic bacteria from 4th instar larva of
孙佑赫 熊智 王金华 张武先 王海林
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DOI:
作者单位:西南林业大学昆明650224
中文关键词:思茅松毛虫,肠道好氧细菌,多样性,ARDRA,鉴定
英文关键词:Dendrolimu kikuchii,intestinal aerobic bacteria,diversity,ARDRA
中文摘要:从思茅松毛虫Dendrolimu kikuchii Matsumura 4 龄幼虫肠道环境中分离、纯化、培养,获得11 株好氧细菌菌株。以细菌基因组DNA 为模板,用细菌通用引物(27f、1492r)对模板进行PCR 扩增,并用4 种限制性内切酶HaeⅢ、HindⅢ、HinfⅠ、TaqⅠ对PCR 产物进行ARDRA( amplified rDNA restriction analysis)多态性分析,在84% 的
相似水平上可分成6 大类群,多样性丰富。对6 大类群的代表菌株进行16S rDNA 序列测定,分析表明:分离到的
11 株好氧细菌中4N05、4N08 和4N11 归属克雷伯氏杆菌属( Klebsiella sp. ),4N02 归属Lysinibacillus 属; 4N03 和4N09 确定到种,分别是γ-变形杆菌(Gamma proteobacterium)和枯草芽孢杆菌( Bacillus subtilis strain) ;4N04、4N06、4N07 和4N01、4N10 也可以确定到种,其中前3 株是短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis strain),后2 株是沼泽短芽孢杆菌(Brevibacillus limnophilus strain),并且这5 株菌都归属短芽孢杆菌属( Brevibacillus sp. )。通过研究,既可以为松毛虫的生物防治提供微生态理论依据,又丰富了微生物资源库。
英文摘要:11 strains of aerobic bacteria were isolated from the intestine of Dendrolimu kikuchii Matsumura using the
plating method. Bacterial genomic DNA was used as templates. A new method of analyzing the genetic diversity ofintestinal aerobic bacteria was established using the PCR technique ( primer27f,1492r) and ARDRA patterns,whichused enzyme digestion (HaeⅢ and HindⅢ,HinfⅠ and TaqⅠ) of cloned 16S rDNA gene sequences. The results showthat 11 strains could be divided into 6 groups at a similarity level of 84% . The results prove that Dendrolimu kikuchii hasa genetically diverse,aerobic,intestinal bacterial fauna. Analysis of full-length 16S rDNA sequences from representativestrains of the identified bacterial groups showed that these strains belong to Klebsiella sp. ( 4N05,4N08 and 4N11 ),Lysinibacillus sp. (4N02),Gamma proteobacterium (4N03),Bacillus subtilis strain (4N09),Brevibacillus sp. (4N04,4N06,4N07,4N01 and 4N10 ) . This study provides a theoretical basis for the microbiological control ofDendrolimu
kikuchii and enriches the microbial resources library.,identification.
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