粘虫β-actin基因cDNA的克隆、序列分析及表达量检测
Molecular cloning, sequence analysis and expression detection of β-actin gene in the oriental armyworm, Mythimna separata
李 柯1, 2** 阴 环2 奚耕思1 廉振民1，3***
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DOI：
作者单位：1. 陕西师范大学 生命科学学院 西安 710062; 2. 山西师范大学 生命科学学院 临汾 041004；
中文关键词： 粘虫，β-actin基因， 克隆
英文关键词： Mythimna separata, β-actin gene, cloning
中文摘要：
β-actin 基因作为actin家族的一员，在基因定量实验中常用作内参基因。本实验运用RT-PCR和RACE技术，以粘虫Mythimna separata (Walker)cDNA为模板，对β-actin基因进行克隆获得全长cDNA序列，并利用生物信息学方法，对β-actin基因全长cDNA序列及推测得到的β-actin蛋白序列进行分析。结果表明，获得的粘虫核β-actin基因cDNA序列长度为1 472 bp，其中包括68 bp的5′非编码区、273 bp的3′非编码区和1 131 bp的开放阅读框，编码一个376个氨基酸蛋白，具有actin蛋白家族典型特征。推测得到的粘虫β-actin蛋白理论分子量为41.7497 ku，等电点为5.29，富含6种类型的特定功能位点。该蛋白序列与其他动物β-actin蛋白序列具有97.9 %～99.7 %高度同源性。β-actin表达量检测结果显示β-actin在6种不同组织间表达无显著差异（P>0.05），表明β-actin可作为研究粘虫不同基因表达水平高低的可靠内参基因。该基因的cDNA序列已经递交GenBank并获得登录号为GQ856238。
英文摘要： β-actin, a member of the actin family, is often used as an internal standard in quantitative gene analysis. In this study, a full-length cDNA of the β-actin gene from Mythimna separata (Walker) was cloned using RT-PCR and the RACE technique. The results show that this cDNA is 1 472 base pairs (bp) long and contains a 5′-untranslated region (5′ -UTR) of 68 bp and a 3′-untranslated region (3′ -UTR) of 273 bp. The open reading frame (ORF) of 1 131 bp encodes a 376 amino acid protein with a predicted molecular weight of 41.7497 ku and PI value of 5.29. This predicted protein contains 6 functional sites, shares the typical actin family signature and 97.9 %～99.7 % identity with actin from other animals. Quantitative assays indicate that there was no significant difference (P>0.05) between 6 different tissues, suggesting that β-actin is a reliable internal control in M. separata. The cloned cDNA has been submitted to GenBank (Accession number: GQ856238).